1U/uL bassa concentrazione di T4 DNA ligasi

Descrizione di prodotto

T4 DNA ligasi, LC

Cat. No./Specifica: E1014-E/1,000 Weiss U
Concentrazione: 1 U/μl di Weiss

Descrizione del prodotto
La T4 DNA ligasi catalizza la formazione di legami fosfodiester tra i termini 5'-fosfato e 3'-idrossili giustaposti nel DNA o RNA a doppio filamento.Questo enzima è in grado di riparare i segni di un singolo filamento nel DNA a doppio filamento, RNA, o ibridi DNA/RNA, e può unire frammenti di DNA con estremità appiccicose o contuse, ma è inattivo sugli acidi nucleici a singolo filamento.
La DNA ligasi T4 richiede ATP come cofattore.

Condizione di conservazione e durata di conservazione
Conservare a -20°C. Il prodotto è valido per 2 anni.

Fonte
Testa di E. coli ricombinante contenente il gene 30 clonato da batteriofago T4.

Definizione dell'unità
A 37°C, 1 unità di enzima di Weiss catalizza la conversione di 1 nmol di [32PPi] in uno stato di assorbimento di carbonio attivo entro 20 minuti.
L'attività enzimatica è determinata nella seguente miscela: 66 mM Tris-HCl (pH 7,6), 6,6 mM MgCl2, 0,066 mM ATP, 10 mM DTT, 3,3 μM [32P] ortofosfato (PPi).
Una unità di Weiss equivale a circa 200 unità di legatura di fine coesivo (CEU), che equivale al numero di frammenti di DNA digeriti di HindIII che possono essere legati entro 30 minuti a 16°C.λ frammenti di DNA.

Portata di applicazione
- frammenti di DNA generati da enzimi di clonazione
- Prodotti PCR clonati
- Legazione di oligonucleotidi a doppio filamento o adattatori al DNA
- Mutagenesia diretta al sito
- polimorfismo della lunghezza del frammento amplificato (AFLP)
- rilevamento dell' RNA mediato da ligasi
- Riparazione del nick in DNA a doppio filamento, RNA o ibridi DNA/RNA
- Autocircolazione del DNA lineare